V 280: Bell V-280 Valor — Future Long Range Assault Aircraft (FLRAA) |

Содержание

CHRYSLER V 280 Ghia, brown

Категории

…Коллекционные моделиИнструментКраска, химия, материалыМаскиКаталоги, Книги, ЖурналыСборные моделиФототравлениеБоксы и стеллажи Журнальные серииИгрушкиРадиоуправляемые моделиСувенирыConcept CarАвтоспортАэродромная техникаВоенныеКиноМедицинаПожарныеПолицияПочта / mailСпецслужбыСтроительная техникаТакси

Производители

…3DF Express78artA-ModelAA ModelsAberAbordageAbrexAbteilung502AcademyACEACMEAD-ModumAdvanced ModelingAFV clubAGMAHC ModelsAIM Fan ModelAiresAirFixAK InteractiveAKhobbyAlanAlangerAlclad IIAlex MiniaturesAlezanALFAlmost RealALRAltayaAmercomAmerican DioramaAmerican Heritage ModelsAMG ModelsAmigo ModelsAMKAMMO MIGAmodelAmourAMPAMTAmusing HobbyAnsonAoshima (DISM)Apex RacingApplywood workshopARK modelsARM.PNTArmada HobbyArmaHobbyARMOR35ArmoryArmour CollectionARS ModelArt ModelART-modelAscensioASK ModelsASQATCAtlasAudi MuseumAuhagenAurora HobbyAuthentic DecalsAuto PilenAuto WorldAutoArtAutobahn / BauerautocultAutomodelle AMWAutomodelloAutotime / AutograndAvanstyle (Frontiart)Avart ArhiveAVD ModelsAVD дополненияAVD покрышкиAvisAWMAZModelAzurBachmannBalaton ModellBangBare-Metal Foil Co. BauerBaumiBBRBburagoBegemotBest ModelBest of ShowBetexaBianteBingBizarreBM CreationsBM-ToysBobcat dealerBorder ModelBravo-6BrekinaBrengunBroncoBrooklin ModelsBrummBS DesignBuschby AKBy VolkCaesar miniaturesCar BadgeCararama / HongwellCarlineCarNelCartrixCBModelsCeleroCentauriaCenturyCentury DragonCentury WingsCHIEFF ModelsChina ModelsClassic 43Classic CarlectablesClassicbusClassy HobbyCLC ModelsClearPropCM ModelCMCCMFCMKCMRColibri DecalsCollector’s ClassicsConradCopper State ModelsCorgiCrazy Classic TeamCrown PremiumsCult Scale ModelsCursorCYBER HOBBYD.N.K.DaffiDANmodelsDarksideDas WerkDasModelDAYdiecastETCHDays-goneDeAgostiniDecal ShopDel PradoDenisssModelsDetailCarsDiapetDickie SpielzeugDie-Cast superDie-cast по-домашнемуDifferent ScalesDinky ToysDiOlex ProductionDioparkDioramaTechDiP ModelsDirekt CollectionsDistlerDMA Hue StudioDNADoctor DecalDong GuanDora WingsDorlopDragonDSPIAEDUPLI COLORDVCEaglemossEasy ModelEbbroEco-Wood-ArtEdison GiocattoliEdmon StudioEduardEidolon Make-UpELFEligorEmanEMC ModelsERAERTLESCIEsval ModelsEUREKA XXLEvergreen (USA)EVR-miniExcelExotoEXPRESSO WINGSExtratechFalcon ModelsFallerFeelin_3dFigutecFine MoldsFirst 43 ModelsFirst ResponseFirst to FightFLAGMANFlyFly Car ModelFlyHawk ModelForces of ValorFore HobbyFormat72Forward-68FoxtoysFranklin MintFranzisFreedom ModelsFriulmodelFrom JapanFrontiartFUGU_GARAGEFujimi MokeiFury ModelsGAMAGarageGarbuz modelsGartexGearboxGecko-ModelsGeminiJetsGems & CobwebsGIMGK Racer SeriesGlencoe modelsGLMGMP / ACMEGMU ModelGold Medal ModelsGoldvargGorky ModelsGP ReplicasGreat Wall HobbyGreen Stuff WorldGreenlightGroup MastersGT AutosGT SpiritGTI CollectionGuiloyGuisvalGunTower ModelsHachetteHarder_SteenbeckHartoy Inc. HasbroHasegawaHat Plastic ModelsHedgeModelsHekiHellerHerpaHi-StoryHigh SpeedHighway 61HistoricHK ModelsHobby 2000Hobby BossHobby DesignHobby MasterHobby PlanetHobbyCraftHomerHot WheelsHot Wheels EliteHPIHumbrolI Love Kiti-ScaleIBG ModelsICMICV (СПб)IGRAIlarioInno ModelsInterusIOM-KITISTISTPlusItaleriIVYIXOJ-CollectionJACOJada ToysJadiJASJB ModellautosJF CreationsJim ScaleJoalJohn Day ModelsJohnny LightningJolly ModelJouef EvolutionJoy CityJTKK-ModelKadenKajikaKangnamKatoKAV modelsKDWKengFaiKESS ModelKineticKing starKinsmartKitechKitty HawkKK ScaleKondorKorean modelsKOVAPKovozavody ProstejovKP ModelsKremlin Vehicle parkKuivalainenKV ModelsKyoshoK_S Precision MetalsLa Mini MinieraLada ImageLastochkaLaudoracing-ModelsLCD MODELSLe Mans MiniaturesLeadwarriorLenmodeLLeo ModelsLev ResinLeX modelsLIFE in SCALELife MiniaturesLion-ToysLionRoarLittle dumpLiveResinLledoLooksmartLouis SurberLP ModelsLS CollectiblesLucky DiecastLucky ModelsLucky PlanLUSO-toysLuxcarLuxury CollectiblesLuxury die-castM-SmartM2 MachinesM4 MAC DistributionMacadamMACHETEMagic ModelsMaistoMajoretteMake UpMAKSIPROFManWahMaquetteMarklinMARSMars ModelsMarsh ModelsMARTINMASTERMaster BoxMaster ModelMaster ToolsMasterClubMasterCraftMatchboxMatrixMax-ModelsMaxi CarMAXI COLORMaxichampsMaxima ScaleMaxModelsMBH ModelsMCWMD-modelsMengMercuryMeritMetroMicro Scale DesignMIG productionsMIL CustomsMilestone MiniaturesMilitaryWheelsMini GTMINI MANMinialuxeMiniarmMiniArtMiniaturmodelleMinibaseMinichampsMiniClassicMinicraftMiniCraft Scale ModelsMiniHobbyModelsMiniTankMiniWarPaintMIRAMirage HobbyMirror-modelsMISTERCRAFTMiticaMMPModel BoxModel PointModel-IconsModelCarGroupModelcollectModelerModelGunmodelkModellingMasterModelLuxModelProModelSvitModimioMODUS 90MolotowMondo MotorsMondseeMonogramMONTI SYSTEMMoonMoremMorrisonMosKitMotipMotor MaxMotoramaMotorartMotorheadMotoScaleModelsMPCMPMMR CollectionMr. HobbyMTech (M4)Nacoral S.A.NEONeomegaNew PenguinNew RayNH DetailNickelNik-ModelsNittoNMDNochnonameNorevNorscotNorthStar ModelsNostalgieNVANZG ModelleOdeonOKB GrigorovOld CarsOLFAOlimp ModelsOne by One ProductionONYXOpus studioOrionORNST modelOtto MobileOvs-DecalsOxfordPacific88Palma43Panda HobbyPANTHEONPanzerstahlParagonPasDecalsPasModelsPaudi ModelsPavla ModelsPB Scale ModelsPegas-ModelsPegoPhoenix MintPikoPinKoPlatzPlusmodelPMSPolistilPorsche MuseumPotato CarPremium ClassiXXsPremium CollectiblesPremium Scale ModelsPremiumXPrint ScaleProDecalsProgetto KPrommodel43Prop&JetProvence MoulagePSTPt ModelsQuartzoQuickboostQuinta StudioRacing Champions inc.Rare Car ModelsRARESINRAROGRastarRB ModelRBA CollectiblesRebel CustomRecord — M.R.F.Red BoxRed Iron ModelsRed LineRenn MiniaturesRenner WerbemittelReplicarsResKitRetro WingsRevaroRevellRextoysREXxRickoriddikRietzeRiich ModelsRIORMZ HobbyRO MODELSRoad ChampsRoad KingsRob-TaurusRodenROSRossoRosso & FlyRoubloffRPG-modelRPMRS ModelsRTMRuppert KoppRusAirRussian collectionRye Field ModelS-ModelSABRESabreKitsSaicoSC Johnson (USA)Scale For SoulScaleGarageSchabakSchucoSEATSG-ModellingShelby CollectiblesShurikenSignatureSIKUSkale WingsSKIFSky-HighSmerSMMSnakeModelSochi 2014SolidoSophiArtSouth FrontSOVA-MSoviet ArmourSparkSpAsovSpecial HobbyStalingradStarlineStart Scale ModelsSTC STARTSTMStudio Perfect ModelSullen-ModelistSunnysideSunstarSuper ASuyataSwordSX-ArtS_BT-ModelT. R.L. ModelTakomTameo KITsTamiya (J)TANMODELTarmacTech4TecnomodelTeknoTemp modelsThunder ModelTic TocTiger ModelTin WizardTins’ ToysTippcoTMTmodelsTOGATomicaTop MarquesTop ModelTop Model CollectionTopSpeedToxso ModelTraxTriple 9TristarTrofeuTrumpeterTSM ModelUCC CoffeeUltimate DiecastULTRA modelsUM Military TechnicsUM43UMIUnimaxUniversal HobbiesunoMAGUpRiseUT ModelsV.V.M / V.M.M.V43Vallejovanamingo-nnVanboVanguardsVAPSVectorVector-ModelsVeeHobbyVeremVery FireVespid ModelsVictoriaVintage Motor BrandsVIPcarVitesseVixenVM modelsVMmodelsVmodelsVOIIOVoyagerModelVrudikW-modelW.M.C. ModelsWar MasterWasanWaterlooWeiseWellyWEMWEMI ModelsWerk83White BoxWhite RoseWikingWilderWingsyWinModelsWIX CollectiblesWM KITWSIXQ Xuntong ModelYat MingYVS-ModelsZ-ModelsZack AtakZebranoZedvalZip-maketZISSZZ ModellаRтБаZаАБ-МоделсАвто-бюроАвтоистория (АИСТ)АвтопанорамаАвтопаркАГАТАиФАканАМформаАнтонюкартель УниверсалъАтелье Etch modelsАтомБурБеркутБригадирВитязьВМТДВойны и битвыВолжский инструментВосточный экспрессВЭС (Воронеж)Гараж на столеГРАНЬГрузы в кузовДекали BossДекали ModelLuxДекали SF-AutoДилерские модели БЕЛАЗДругойЕКБ-modelsЗвездаИмпериалъКазанская лабораторияКиммерияКОБРАКолхоZZ DivisionКомбригКомпаньонЛитература (книги)ЛОМО-АВММажор Моделсмастер Dimscaleмастер ВойтовичМастер ДровишкинМастер Захаровмастер Колёсовмастер ЛепендинМастер СкаляровМастерПигментМастерская Decordмастерская JRМастерская SECМастерская АВТОДОРМастерская ГоСТМастерская ЗнакМастерская КИТМастерская МЕЛМастерская РИГАМаэстро-моделсМикродизайнМикроМирМиниградМинимирМир МоделейМодел. лабМОДЕЛИСТМоделстройМодель-СервисМодельхимпродуктМоя модельМР СТУДИЯНаш АвтопромНаши ГрузовикиНаши ТанкиОгонекПАО КАМАЗПетроградъПетроградъ и S_BПламенный моторПланета ПатворковПобедаПрапорПрестиж КоллекцияПромтракторПТВ СибирьПУЗЫРЁВЪРетроЛабРусская миниатюраРучная работаСарлабСВ-МодельСделано в СССРСергеевСибртехСМУ-23.SСоветский Автобус (СОВА)СолдатикиСоюзМакетСПБМСТАРТ 43Студия КАНСтудия КолесоСтудия МАЛСтудия ОфицерТанкоградТАРАНТемэксТехнологТехноПаркТри А СтудиоТри БогатыряТРЭКСУральский СоколФарфоровая МануфактураФинокоХерсон-МоделсЦейхгаузЧЕТРАЭ.В.М.ЭкипажЭлеконЭскадраЮный коллекционер

Марки моделей

…AbarthACAcuraADLERAECAGUSTAWESTLANDALFA ROMEOALPHA TAURIALPINE ALVISAMCAMERICAN LaFranceAMPHICARArmstrongAROArrowsARTEGAASCARIASTON MARTINAUBURNAUDIAURUSAUSTINAustro DaimlerAUTO UNION AutobianchiAVIAAWZBACBARKASBarreirosBATMOBILEBEDFORDBEIJINGBenelliBENETTONBENTLEYBERLIETBERNARDBESTURNBIANCHIBIZZARINIBLUEBIRDBMWBobcatBORGWARDBRABHAMBrawner-HawkBRISTOLBRMBUCCIALIBUFFALOBUGATTIBUICKBussingBWTCADILLACCAPAROCASECATERHAMChanganChangheCHAPARRALCHAUSSONCHECKERCHEETAHCHEVROLETCHEVRONCHRYSLERCISITALIACITROENCOBRACOMMERCooperCOPERSUCARCORDCORVETTE CORVIAR MONZACsepelDACIADaewooDAFDAIHATSUDAIMLERDALLARADATSUNDE DION BOUTONDe SotoDE TOMASODELAGEDELAHAYEDeLOREANDENNISDerwaysDESOTODEUTZ DevonDIAMONDDKWDODGEDongfengDONKERVOORTDUBONNETDUCATIDUESENBERGDYNAPACEAGLEEBROEDSELEMWENVISIONFACEL-VEGAFAWFENDTFERRARIFIATFORDFORDSONFOTONFRAMOFREIGHTLINERFSOFWDGINAFGMCGOGGOMOBILGOLIATHGORDONGRAHAMGREAT WALLGreyhoundGUMPERTHAMMHANOMAGHARLEY DAVIDSONHEALEYHENSCHELHindustan HINOHISPANO SUIZAHITACHIHOLDENHONDAHORCHHOTCHKISSHUDSONHUMBERHUMMERHYUNDAIIAMEIFAIKARUSIMPERIALINFINITIINGINNOCENTIINTERNATIONALINVICTAIRISBUSISOISOTTA FraschiniISUZUIVECOJAGUARJAWAJEEPJELCZJENSENKAISERKalmarKAWASAKIKENWORTHKIAKOENIGSEGG KOMATSUKRAMERKRUPPKTMLA SALLELAGONDALAMBORGHINILANCIALAND ROVERLANDINILanzLatilLaurin & KlementLaverdaLDSLEXUSLEYATLEYLANDLEYTONLIAZLIEBHERRLIGIERLINCOLNLISTERLLOYDLOCOMOBILELOLALORENZ & RANKLLORRAINE-DIETRICHLOTECLOTUSLUBLINLYKANMACKMAD MAXMAGIRUSMANMARCHMARMONMARUSSIA-VIRGINMASERATIMASSEY MATRAMAVERICKMAXIMMAYBACHMAZDAMAZZANTIMCAMcLARENMEGAMELKUSMERCEDES-BENZMERCERMERCURYMESSERSCHMITTMGBMIGMIKRUSMINARDIMINERVAMINIMIRAGEMITSUBISHIMONICAMORETTIMORGANMORRISMOTO GUZZIMULTICARMVMZNASH AMBASSADORNEOPLANNEW HOLLANDNISSANNIVA CHEVROLETNOBLENORMANSUNYSAOLDSMOBILE OLTCITOM LEONCINOOPELOPTIMASORECAOscaPACKARDPAGANIPanhardPANOZPANTHERPEGASOPESCAROLOPETERBILTPEUGEOTPHANOMEN PIERCE ArrowPLYMOUTHPOLONEZPONTIACPORSCHEPRAGAPRIMAPRINCE PUMARAMRAMBLERRED BULLRENAULTRoburROCARROLLS-ROYCEROSENBAUERROSENGARTROVERRUFSAABSACHSENRINGSALEENSALMSONSAMSUNGSANSANDEROSATURNSAUBERSaurerSAVASAVIEM SCAMMELSCANIASCIONScuderiaSEAGRAVESEATSETRASHADOWSHANGHAISHELBYSIMCASIMPLEXSIMSONSINPARSKODASMARTSOMUASoueastSPYKERSSANG YONGSSCSTANLEYSTARSTEYRSTUDEBAKERSTUTZSUBARUSUNBEAMSUZUKISYRENATALBOTTARPANTATATATRATEMPOTeslaTHOMASTolemanTOYOACETOYOPETTOYOTATRABANT TRIUMPHTUCKERTUKTVRTYRRELLUNICVan HoolVANWALLVAUXHALLVECTORVELOREXVENTURIVERITASVESPAVincentVOISINVOLKSWAGENVOLVOWANDERERWARSZAWAWARTBURGWESTERN STARWHITEWIESMANNWILLEMEWILLIAMSWillysYAMAHAYOSHIMURAYUGOZAGATOZASTAVAZUKZUNDAPPZunderZYTEKАМОБЕЛАЗВИСВНИИТЭ-ПТВолжскийГорькийЕрАЗЗАЗЗИLЗИSЗИМЗИУИЖКАЗКамскийКИМКРАЗКубаньКурганскийЛАЗЛенинградЛикинскийЛуаЗМинскийМоАЗМОСКВИЧМТБМТЗНАМИНАТИОДАЗПавловскийПЕТРОВИЧПУЗЫРЁВЪРАФРУССО-БАЛТСаранскийСемАРСМЗСТАРТТАРТУУАЗУралЗИSУральскийЧЕТРАЧМЗАПЯАЗЯТБ

Типы товаров

. ..ДекалиЗапчасти, аксессуарыЭлементы диорамАвиацияВоенная техникаВодный транспортЖ/Д транспортАвтобусВнедорожник / КроссоверГрузовикКемперГужевая повозкаЛегковой автомобильМикроавтобус / ФургонМотоциклПикапПрицепыТракторы, комбайныТроллейбусФигурки

Масштаб

…1:11:21:31:41:51:61:81:91:101:121:141:161:181:201:211:221:241:251:261:271:281:291:301:321:331:341:351:361:371:381:391:401:421:431:441:451:461:471:481:501:511:521:531:541:551:561:571:601:641:681:691:721:751:761:801:831:871:901:951:961:1001:1031:1081:1101:1121:1201:1211:1251:1261:1301:1421:1441:1451:1481:1501:1601:2001:2201:2251:2501:2851:2881:3001:3501:3901:4001:4261:4501:5001:5301:5351:5501:5701:6001:7001:7201:8001:10001:11001:12001:12501:15001:20001:25001:27001:3000

СброситьНайти

Испытания конвертоплана Bell V-280 Valor

03.09.2018

Первый полет конвертоплана Bell V-280 Valor (б/н N280BH) состоялся 18 декабря 2017 г. в г. Амарилло (шт. Техас). Полету предшествовали наземные испытания суммарной продолжительностью 35 ч.

Конвертоплан V-280 предназначен для демонстрации и проверки конструктивно-технологических решений перспективного винтокрылого ЛА, он разработан и построен в рамках реализации программы JMR-TD (Joint MultiRole-TechnologyDemonstrator). В рамках данной программы также построен двухместный вертолет гибридной схемы Sikorsky–Boeing SB-1 Defiant с соосными несущими винтами. Конвертоплан V-280 в определенной степени представляет собой эволюцию концепции конвертоплана V-22 Osprey. Сборка конвертоплана V-280 началась на заводе фирмы Bell в г. Амарилло в 2015 г. и была завершена в 2017 г. Сертификат FAA в категории экспериментальных ЛА конвертоплан V-280 получил 17 июля 2017 г., такой сертификат разрешает эксплуатацию ЛА, не имеющего полноценного сертификата типа, он допускает проведение наземных и летных испытаний. К выполнению пробных рулежек конвертоплан V-280 приступил 4 октября 2017 г. , 7 октября была достигнута 100%-ая частота оборотов винтов; 27 октября 2017 г. выполнен поворот пилонов с винтами от 95C до 75C и обратно. Впоследствии отклонение винтов выполнялось в полном диапазоне углов, от 5C (вертикальные взлет и посадка). Первый полет выполнялся без перевода конвертоплана в режим полета «по-самолетному», только на режиме висения, вмешательство экипажа в управление было сведено к минимуму; продолжительность полета составила две минуты.

Особенностями конструкции конвертоплана V-280 являются интегральное бронирование кабины, электродистанционная система управления полетом, современный бортовой комплекс обороны, полетная система обмена информацией. По максимальной скорости и продолжительности полета конвертоплан V-280 более чем в два раза превосходит существующие вертолеты. На конвертоплане Bell V-280 Valor (N280BH) установлены два ТВД General Electric Т64-GE-419 мощностью по 4750 л. с.

Первый полет в крейсерском режиме конвертоплан V-280 совершил 11 мая 2018 г. В самолетном режиме конвертоплан набрал скорость, равную 352 км/ч.

18 июня 2018 г. фирма Bell впервые устроила публичную летную демонстрацию конвертоплана V-280 в международном аэропорту «Амарилло». Конвертоплан выполнил взлет с разбегом, в полете достиг истинной скорости 323 км/ч (296 км/ч по прибору), выполнялись крены с углами до 45C; посадка была произведена «по-самолетному», с пробегом. К середине июня 2018 г. конвертоплан налетал по программе летных испытаний 38 ч, а суммарное время наработки винтов составило 108 ч, наработка трансмиссии 800 ч. В полетах конвертоплан выполнял круговой разворот в режиме висения, посадки в вертолетном и самолетном режимах, развороты с углами крена до 45C. Пилоны винтов поворачивались от 0C (режим поступательного полета) до 95С в диапазоне от 95С до 0; в полете была достигнута скорость, равная 360 км/ч. В 2018 г. на конвертоплан V-280 планируется установить пилотажную систему Lockheed Martin PDAS (Pilotage Distributed Aperture System). В отличие от оптоэлектронной системы Northrop Grumman DAS (Distributed Aperture System), используемой на истребителе Lockheed Marti F-35, система PDAS обеспечивает членам экипажа круговой сферический обзор. В состав системы PDAS входят шесть средневолновых ИК-камер, распределенных по поверхности конвертоплана, вычислительный блок и монокулярные устройства отображения изображения, интегрированные в защитные шлемы летчиков. Программой летных испытаний на 2018 г. предусмотрена проверка ключевых ЛТХ конвертоплана: достижения крейсерской скорости в 518 км/ч, выполнения режима висения на высоте 1800 м при температуре атмосферного воздуха до +35С, маневренности на малых высотах, а также боевого радиуса действия до 423 км.

Программа JMR-TD является частью более обширной программы FVL (Future Vertical Lift). В рамках программы FVL планируется разработать четыре варианта (Capability sets) скоростных винтокрылых ЛА, предназначенных для замены 6500 вертолетов разных типов, состоящих на вооружении авиации армии, КМП, ВМС и ВВС США. ЛА Capability set 1 и 2 призваны заменить боевые вертолеты Bell АН-1 Cobra и Boeing АН-64 Apache; Capability set 3 – многоцелевые вертолеты Bell UH-1 и Sikorsky UH-60; Capability set 4 – тяжелые транспортные вертолеты Boeing СН-47 и Sikorsky СН-53. Наиболее массовым должен стать ЛА Capability set 3.

Конкурентом конвертоплана V-280 является вертолет гибридной схемы Sikorsky–Boeing SB-1 Defiant. Программа вертолета SB-1 отчасти пересекается с программой вертолета Sikorsky S-97 Raider: оба вертолета спроектированы по схеме с жестким соосным несущим винтом и дополнительным толкающим. Вертолет SB-1, как и конвертоплан V-280, спроектирован согласно требованиям к перспективному винтокрылому ЛА FVL Capability set 3, предназначенному для замены вертолета Sikorsky UH-60 Black Hawk. Вертолет S-97 призван удовлетворить требования к ударно-разведывательному ЛА FVL Light. В августе 2017 г. первый прототип вертолета S-97 выполнил жесткую аварийную посадку, испытательные полеты были прекращены на 11 мес. и возобновились 19 июня 2018 г., когда в воздух поднялся второй опытный образец.

По материалам ЦАГИ

Теги записи: Bell V-280 Valor, Bell-Boeing V-22 Osprey, S-97 Raider, Sikorsky–Boeing SB-1 Defiant

Измерение концентрации белка по поглощению при 280 нм

Принцип

Белки в растворе поглощают ультрафиолетовый свет
с максимумами поглощения при 280 и 200 нм. Аминокислоты с
ароматические кольца являются основной причиной пика поглощения
при 280 нм. Пептидные связи в первую очередь ответственны за
пик при 200 нм. Вторичная, третичная и четвертичная структура
все они влияют на абсорбцию, поэтому такие факторы, как pH, ионная
прочность и т. д. могут изменить спектр поглощения.

Оборудование

В дополнение к стандартным расходным материалам для работы с жидкостями
требуется спектрофотометр с УФ-лампой и кварцевая кювета.

Процедура

Выполните шаги 1-4 (только 280 нм) для очень
грубая оценка. Выполните все шаги, если контаминация нуклеиновой кислотой
похоже.

Прогрев УФ-лампы (около 15 мин.)
Настройка длины волны на 280 нм
Калибровка до нулевой абсорбции только с буферным раствором
Измерение абсорбции белкового раствора
Настройка длины волны на 260 нм
Калибровка до нулевой абсорбции только с буферным раствором
Измерение абсорбции белкового раствора

Анализ

Неизвестные белки или белковые смеси. Использование
следующую формулу для приблизительной оценки концентрации белка.
Длина пути для большинства спектрометров составляет 1 см.

Концентрация (мг/мл) = поглощение при 280 нм
разделить на длину пути (см.)

Чистый белок с известным коэффициентом поглощения. Использование
следующая формула для пути длиной 1 см. Концентрация
выражается в мг/мл, % или молярности в зависимости от типа коэффициента
используется.

Концентрация

= поглощение при 280 нм, деленное
по коэффициенту поглощения

Чтобы преобразовать единицы измерения, используйте следующие отношения:

мг белка/мл = % белка, деленный на 10 = молярность
деленная на молекулярную массу белка

Неизвестный с возможным загрязнением нуклеиновой кислотой. Использование
следующая формула для оценки концентрации белка:

Концентрация (мг/мл) = (1,55 x A280) — 0,76
х А260)

Холодные растворы могут запотеть в кювете.
теплые растворы могут выделять пузырьки и мешать показаниям.
Для концентрированных растворов (поглощение больше 2) просто
разбавить раствор.

Коэффициенты поглощения некоторых распространенных белков
стандарты:

Бычий сывороточный альбумин (БСА): 63
IgG крупного рогатого скота, человека или кролика: 138
Куриный овальбумин: 70

Ссылки

Лейн, Э. Спектрофотометрические и турбидиметрические методы
для измерения белков. Методы энзимологии 3: 447-455.
1957.
Штошчек, см. Количественное определение белка. Методы
в энзимологии 182: 50-69. 1990.

Количественное определение белка с использованием поглощения при 280 нм

ПРЕДПОСЫЛКИ

Количество белков (и, следовательно, косвенно, клеток) в образце можно количественно определить путем прямой оценки поглощения при 280 нм. Зависимость поглощения при 280 нм от концентрации белка является линейной.

Ароматические кольца некоторых аминокислот (главным образом триптофан и тирозин и в меньшей степени фениланин) белков в растворе поглощают ультрафиолетовый свет с длиной волны 280 нм.

Поглощение при 280 нм можно использовать для оценки минимум 100 мкг белков (при концентрации от 20 до 3000 мкг/мл), что примерно соответствует 200 000 клеток.

плюсы и минусы

Это быстрый и удобный метод, так как не требуются дополнительные реагенты или инкубации.

Однако все небелковые компоненты раствора, поглощающие ультрафиолетовый свет с длиной волны 280 нм, могут мешать измерениям. Поскольку различные белки, нуклеиновые кислоты и внутриклеточные метаболиты имеют очень разные характеристики поглощения, может быть значительная ошибка, особенно в сложных смесях, таких как клеточные лизаты.

Основные мешающие вещества, помимо нуклеиновых кислот, нуклеотиды, такие как АТФ или НАД(Ф), гемсодержащие соединения, такие как цитохромы, реагенты, содержащие сульфгидрильные группы, такие как 2-меркаптоэтанол, дитиотреитол, глутатион или цистеин.

Спектр поглощения тирозина зависит от pH, но при 280 нм как протонированная, так и непротонированная формы имеют одинаковые коэффициенты поглощения, поэтому нет необходимости проводить измерения при определенном pH.

Спектр поглощения тирозина зависит от рН, но протонированная и непротонированная формы этой аминокислоты имеют одинаковые коэффициенты поглощения при 280 нм, поэтому нет необходимости проводить измерения при конкретном рН. Однако, поскольку вторичная, третичная и четвертичная структуры белков могут влиять на абсорбцию, такие факторы, как pH, ионная сила и т. д., должны поддерживаться постоянными в различных исследуемых образцах.

Будьте осторожны при использовании DTT в буфере для солюбилизации белков! ДТТ со временем окисляется, оставляя продукт, который поглощает при 280 нм. Если вы заморозите образцы белка, а затем разморозите образец через определенный период времени, невозможно узнать концентрацию окисленного ДТТ, и это может повлиять на измерение!

Поскольку стекло и пластик поглощают УФ-излучение, необходимо использовать кварцевые кюветы (но на рынке также имеются одноразовые пластиковые кюветы , прозрачные для УФ-излучения)

Протокол (метод Варбурга и Кристиана)

Рис. 1. Спектр поглощения нуклеиновых кислот и белков. Нуклеиновые кислоты имеют пик поглощения при 260 нм, белки при 280 нм. Однако нуклеиновые кислоты также поглощают световое излучение при 280 нм, по этой причине при дозировке белков в клеточном лизате необходимо учитывать их присутствие и интерференцию

Важное замечание перед началом: Поскольку мы работаем с сырым лизат клеток, в состав которого помимо белков входят нуклеиновые кислоты, необходимо использовать метод (Варбурга и Кристиана), учитывающий интерференцию азотистых оснований нуклеиновых кислот, также поглощающих (хотя и менее эффективно) электромагнитное излучение при 280 нм (рис. 1).

Растворите клеточные монослои и/или клеточные пеллеты в лизирующем буфере соответствующего объема (в качестве примера: 0,5–1,0 М NaOH, нагревая их до 100 °C в течение 30 минут или оставляя на ночь при комнатной температуре. В качестве альтернативы вы можете используйте раствор с 0,3 М NaOH и 1% лаурилсульфатом натрия (SLS), в этом случае необходимо подождать 30 мин при комнатной температуре).
Чтобы избежать рассеивания света, i t важно убедиться, что раствор белка не мутный . Центрифуга при 10000 об/мин в течение 10 минут при 4 градусах Цельсия для удаления клеточного мусора.

Включение УФ-лампы спектрофотометра (или планшет-ридера)
Выберите показатель поглощения при 280 нм
Исправьте фон с помощью кюветы, содержащей только раствор, в котором вы лизировали клетки
Измерьте абсорбцию белкового раствора и вычтите абсорбцию контрольного образца

Для оценки интерференции нуклеиновых кислот

Выберите показатель поглощения при 260 нм
Калибровка до нулевой абсорбции только с буферным раствором
Измерение абсорбции белкового раствора

Чтобы оценить наличие клеточного дебриса, который увеличивает мутность раствора, можно проверить абсорбцию при 320, которая должна быть меньше 0,02 – см. ниже.

БУДЬТЕ ОСТОРОЖНЫ

Холодные растворы могут запотеть в кювете, а теплые растворы могут образовывать пузырьки и мешать показаниям.

Для концентрированных растворов (абсорбция выше 1,4) просто разбавьте раствор.

Расчет

Используйте следующую формулу для оценки концентрации белка в клеточном лизате:

Концентрация (мг/мл) = [(1,55 x A280) – (0,76 x A260)]*DF

, где A280 – коэффициент поглощения измерено при 280 нм

A260 — это поглощение, измеренное при 260 нм (поправка на нуклеиновую кислоту)

, а DF — коэффициент разбавления, который выражает степень разбавления белка. Если у вас есть исходный белковый раствор, коэффициент разбавления равен 1, если вы разбавляете свой белок (из-за превышения абсорбции 1,5) в соотношении 1:2, то коэффициент разбавления равен 2 и так далее.

Эта формула Варбурга и Кристиана рассчитана на длину оптического пути 1 см. Поглощение при 260 нм (A260) объясняет интерференцию нуклеиновых кислот. (Warburg, O. and Christian, W. Biochem. Z. 310: 384 (1941)).

Можно использовать дополнительную коррекцию фона (A280-A320), учитывающую наличие дисперсии частиц в растворе (например, клеточного дебриса).

V 280: Bell V-280 Valor — Future Long Range Assault Aircraft (FLRAA)